法政先锋们的故事还在继续，这次的主角是法证部的高级化验师布国栋（黎耀祥 饰）。号称“人肉百科全书”的国栋知识渊博，且一直不断学习，他与法医科高级医生钟学心（张可颐 饰）既是事业上的伙伴，又是生活中的好友，共同研究工作上的疑难杂事，又互相倾诉生活中的困扰。学心的好友凌倩儿（徐子珊 饰）任职于西龙九重案组，作为高级督察的她，身手了得，和警长李展风（吴卓羲 饰）是好拍档。法医部、警界等因为各类案件而经常需要合作，而正是在他们的联努力下，一起起棘手的案件被侦破。
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邓厚昌（关海山 饰）和王小燕（南红 饰）回港度假，喜见女儿邓家丽（梁艺玲 饰）觅得男友关秉仁（魏骏杰 饰），殊不知两人是假情侣。原来丽兄邓家强（雷宇扬 饰）与丽好友马冬欣（吴咏红 饰）合伙做生意受骗，债台高筑，得悉昌愿意资助女婿做生意，便要求丽做戏以暂借父钱过难关，岂料丽、仁戏假情真，渐生情素。这时燕竟重遇冤家陈婉君（白茵 饰），当年燕夺去君男友昌，两人由友变敌，燕怕君夺回昌，实行继续斗法，却揭发君乃欣母，而仁、丽是假情侣，昌感被骗，决不助强，强自此消沉，幸得表妹王群娣（蔡嘉莉 饰）之鼓励才振作过来。其实欣才是仁女友，竟揭穿他与丽已生情。君、燕更是唆摆自己女儿争夺仁，令仁甚困扰，后仁扮作花花公子试探两女，发现丽对他一往情深，而另一方面，欣认识了医生夏逸翔（戴志伟 饰）亦情有所归。丽、欣再成为好友，而燕、君宿怨终在一次患难中冰释，此时大家才明白，过去意气之争实属太无聊。
胸无大志的装修工人令狐飞（吴肇轩饰）因为仰慕地产经纪欣猪（陈颖欣饰）而在阴差阳错下加入马王（郑浩南饰）所创办的“和联兴地产”，与自称科创界才俊的盲鸡（胡子彤饰）、铜牌运动员阿鹿（邱士缙饰）及痴情会计肥龟（徐浩昌饰）成为了见习地产经纪（地产仔），在女扮男装的分店经理鱼哥（廖子妤）带领之下，打算在三个月内考取执业牌照、对抗唯利是图的业界龙头“龙星置业”，阻止权倾业界的阿公（郑雪儿饰）、怪兽家长Cat Lok（余香凝饰）、邓氏长子嫡孙邓少（张文杰饰）的旧区重建逼迁计划，保卫街坊家园。
讲述大卫（陈湛文 饰）与玛嘉烈（廖子妤 饰）分手后，与Diamond（卫诗雅 饰）成为知己兼生意合伙人，开设一家水饺店，女主内、男主外。而玛嘉烈亦开展一段新恋情，与城中名厨烈火（傅孟柏 饰）陷入热恋。正当玛嘉烈与大卫以为生命展开新一页后，殊不知命运却又微妙地连结在一起。
齐欢畅（欧阳震华 饰）赌术天赋过人，18岁就跻身世界扑克大赛的总决赛。可是决赛前一时大意，竟遗失了3岁的弟弟齐欢乐。欢畅十分自责，以致在决赛时神不守舍，赌到一半时直接放弃跑出来寻找弟弟，这样他的对手乔初正（苗侨伟 饰）不劳而获的得到了扑克之王的称号。一晃十几年过去了。弟 弟欢乐一直没有消息，欢畅自此彻底沉沦，每天以赌来麻痹自己，而且不赌到输个精光不罢休。欢畅流落到了菲律宾，每日都到乔正初的赌场度日。在赌场打工的周福荣（许绍雄 饰）不忍心欢畅这样折磨自己，用尽一切办法劝他戒赌，乔正初亦伸出援手，为他安排工作，帮他重新做人。欢畅十分感激福荣和正初，三人成了莫逆。这日欢畅在赌场遇上烂赌女青云，和福荣捉弄了青云一番，二人不打不相识，成了朋友。欢畅感到是时候回港找寻亲生弟弟了，于是踏上了回港的飞机。
人心，是一门深奥的科学。人会犯罪作恶，皆因被贪婪、愤怒、软弱和嫉妒等情绪支配。为了逃避刑责，人会利用谎言掩饰真相，用诡计扰乱视线，令法证工作难上加难。未破的悬案、消失的证据、迷失的困局，都是法证团队面对的一个个难关。纵然过程中会受到打击，但他们都会坚持初心，跌倒之后重新出发，不会放弃追寻真相。《法证先锋V》的案件和布局更加让人意想不到，唯有靠着“法证部”、“法医科”及“重案组”这灭罪铁三角，秉承前四季的理念，通力合作，找出真凶，还生者公道，替死者雪冤。
本剧集故事主要讲述香港廉政公署力惩社会上各式各样的行贿贪污事件的故事，分为《造市》、《钉子户》、《维修大鳄》、《死亡保险》和《公·私·车》五个独立的故事单元。《造市》讲述了一起上市公司诈骗案，在廉署锲而不舍的追查下终于人赃并获。《钉子户》描写了一个市区重建贪污诈骗案的故事。《维修大鳄》则讲述了一宗楼宇维修贿赂案。《死亡保险》中廉署则破获了一起人寿保险跨境诈骗案。《公·私·车》讲述的是公职人员利用职权来谋取个人私利的案件。由香港电视广播有限公司与廉政公署合作拍摄的系列时装电视剧《廉政行动2009》，根据真实个案改编而成。众多TVB影视明星林保怡，宣萱，陈键锋，田蕊妮，郭羡妮，蒙嘉慧，杨千嬅，黄浩然等倾情加盟本剧。自1992年以来已出品七辑，ICAC的故事早已深入人心，成为观众最喜爱的电视娱乐节目之一。
恶霸奸人坚（黄子华 饰）是广州旗下街的一霸，他虽然不学无术，但仗着奸诈的脑袋，多年来聚集起一众无赖，横行旗下街。这日奸人坚打着“打败广东十虎黄麒英”的招牌招摇过市时，被初来广州的黄飞鸿（林嘉华 饰）见到，为了帮父亲出口气，飞鸿教训了奸人坚一顿，令奸人坚好不丢脸。随后，奸人坚为了争回一口气，偷走了飞鸿父亲黄麒英的神位，并在再次挑战飞鸿时用它来作挡箭牌威胁他，终于打败了飞鸿出了一口恶气，而飞鸿则被众人认为是懦夫。警察厅厅长认为旗下街的一间姑婆屋档了他的官运，欲除之而后快，于是找来奸人坚帮他去收回姑婆屋。姑婆屋的主人是刚才南洋归来的阿翠（叶童 饰），这是她买来供一班姑婆们养老用的。奸人坚用尽办法和阿翠斗气都没有拿到姑婆屋的屋契，于是，一条毒计又诞生了。
